О технологии проведения гистологического исследования

Ежедневная работа многопрофильной больницы невозможна без диагностики, важной частью которой являются гистологические исследования.

Ежедневная работа многопрофильной больницы невозможна без диагностики, важной частью которой являются гистологические исследования. В Республиканской больнице № 1 – Национальном центре медицины имени М.Е. Николаева прижизненные гистологические и цитологические исследования операционного и биопсийного материала проводятся в патологоанатомическом отделе Консультативно-диагностического центра.

Гистологическому исследованию подлежит любые ткани, получаемые при диагностических или лечебных манипуляциях (операциях), в том числе при эндоскопической, пункционной толстоигольной, аспирационной биопсии, трепанобиопсии, при соскобах, при родах и т.д.

Заведующий отделением, кандидат медицинских наук К.С. Лоскутова рассказала о технологии обработки биопсийного материала.

Образец необходимо помещать в фиксирующий раствор немедленно после взятия. Важно, чтобы кусочки оставались незафиксированным максимально короткое время. Флаконы с материалом следует содержать при температуре не менее 4ºС. При отложенной фиксации дегенерация компонентов ткани начинается сразу после того, как ткань лишается кровоснабжения. Соотношение объема фиксирующего агента и тканевого образца должно быть не менее, чем 20:1.

Особо важной задачей является стандартизация порядка выполнения патолого-анатомических исследований (ПАИ) биопсийного (операционного) материала и требований к организации технологического процесса, порядку лабораторной обработки материала, назначения и использования дополнительных методов окрасок (постановок реакций, определений).

Макроскопическое изучение и вырезка из биопсийного (операционного) материала , с иссечением кусочков органов и тканей и помещением их в фиксирующие растворы проводится врачом-патологоанатомом с учетом клинических рекомендаций (протоколов лечения) по вопросам оказания медицинской помощи с внесением данных макроскопического исследования, регистрационных номеров, назначенных дополнительных методов обработки в протокол. Окончательная фиксация продолжительностью не менее 2-3 часов проводится независимо от того, насколько полноценно материал зафиксирован до загрузки в аппарат, этого времени, при адекватных размерах кусочков, как правило, достаточно, чтобы нивелировать незамеченные недостатки предварительной фиксации материала. В зависимости от времени предварительной фиксации время может быть увеличено до 24 часов. Фиксация производится для предупреждения процессов аутолиза (самопереваривания) тканей, обеспечивает стабилизацию тканевых структур и их уплотнение; Проводка материала — это процедура во время которой происходит обезвоживание образцов и пропитывание парафином. Для проведения проводки используются аппараты для проводки тканей карусельного или процессорного типа (тканевые процессоры) по различным программам проводки в зависимости от типа ткани и размеров образцов, видов и объемов исследуемого материала. В зависимости от используемой программы процедура длится от 6 до 36 часов. Заливка – это процедура помещения образцов в парафин с изготовлением парафиновых блоков с использованием специальных заливочных форм, подбираемых по размеру тканевого образца. Проводится на заливочной станции, оснащенной емкостями для парафина, функцией автоматической подачи парафина, горячими камерами для содержания заливочных форм и кассет с материалом, горячими и охлаждаемыми рабочими поверхностями. Микротомия – это процедура изготовления парафиновых срезов толщиной от 1 мкм до 5 мкм с использованием специального инструмента – микротома и острых лезвий высокого качества. Полученные срезы монтируются на предметные стекла и высушиваются. Окраска – это процедура постановки реакции на полученных срезах ткани на предметном стекле, заключение их под покровное стекло и высушивание микропрепаратов. Для автоматической окраски парафиновых срезов используются специальные приборы – современные роботизированные системы окрашивания срезов:

— гистостейнеры- автоматизированные системы для выполнения всех стандартных методов окрашивания по отдельным протоколам;

— иммуностейнеры- автоматизированные системы для иммуногистохимического окрашивания, с выполнением всех этапов (депарафинизация, инкубация с антителами/зонадами при постоянных, контролируемых условиях, контрастирование препаратов гематоксилином) в одном комплексе в автоматическом режиме.

Окрашенные срезы заключаются под покровное стекло с использованием специализированных гистологических монтирующих сред.

Автомат для гистологической проводки карусельного типа STP-120: — 10 станций для реагентов + 2 парафиновые ванны; — Улучшение качества пропитки ткани за счет функции дополнительного перемешивания; — Возможность дозагрузки материала зачет функции отложенного старта. Работа на заливочной станции. Фельдшер-лаборант (гистолог) высшей квалификационной категории Архипова С.Б и фельдшер-лаборант (гистолог) Колосова М.А. Микротомия на ротационном микротоме. Фельдшер-лаборант (гистолог) высшей квалификационной категории Курчатова А.Д.
Гистостейнер линейного типа. Иммуногистостейнер Подготовка с контролем качества микропрепаратов перед исследованием. Фельдшер-лаборант (гистолог) высшей категории Иванова А.А.
Инфильтративный рак молочной железы. Окраска гематоксилином и эозином. Пигментная меланома пищевода. Окраска гематоксилином и эозином. Хронический гастрит. Окраска гематоксилином и эозином.
Бактерии Helicobacter pylori в биоптате слизистой желудка. Окраска по Граму. Лимфатический узел. Иммуногистохимическое исследование с антителами к микобактериям туберкулеза. Недифференцированный рак. Иммуногистохимическое исследование с антителами к панцитокератину.
Рак молочной железы. Иммуногистохимическое исследование с антителами к онкопротеину HER2/neu. Меланома кожи. Иммуногистохимическое исследование с антителами к Melan A.

Таким образом, проведение прижизненных гистологических исследований является длительным, многоэтапным, сложным технологическим процессом.

В ряде случаев для полноценного патолого-анатомического исследования требуется применение дополнительных специальных методов окраски и/или микроскопии, дополнительные клинические данные и результаты проведенных диагностических исследований

Технологический и диагностический процесс обуславливает различные сроки выполнения патолого-анатомических исследований, которые определены Приказом МЗ РФ от 24 марта 2016 г. № 179н «О правилах проведения патолого-анатомических исследований», от 20 минут до 15 рабочих дней. Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений.

Качество проводимых исследований зависит от строгого соблюдения обработки материала на каждом этапе, использования качественных реагентов и красителей, максимальной автоматизации, квалификации персонала, постоянного внутреннего и внешнего контроля качества. Все технологические процедуры документированы и утверждены в Стандартных операционных процедурах Системы менеджмента качества ГАУ РС (Я) «РБ №1-НЦМ им. М.Е.Николаева».

К.С.Лоскутова

к.м.н., заведующий ПАО КДЦ

Источник

Предложить новость